Teatro skyriuje sukaupti eksponatai - nuotraukos, laiškai, afišos, protokolai, rankraščiai, publikacijos ir kita įvairi medžiaga apie teatrą - iki šiol sudaro didžiausią muziejaus rinkinių dalį. Aktorių Onos Rymaitės ir Unės Babickaitės kolekcijose greta kitų eksponatų saugomi ir jų kostiumai, baldai, asmeniniai daiktai, paveikslai. Teatro skyrius didžiuojasi ir vienu seniausių muziejaus eksponatų - 1687 metų Vilniaus mokyklinio teatro panegirika „Algirdas Didysis Lietuvos kunigaikštis". Vertingi asmeniniai Boriso Dauguviečio, Juozo Vaičkaus, Antano Sutkaus, Andriaus Olekos-Žilinsko, Laimono Noreikos, Dalios Tamulevičiūtės, Audrio Chadaravičiaus rinkiniai ir įvairių laikotarpių Lietuvos teatrų archyvinė medžiaga.

Vertinga ir gausi 1811-1898 metų viešojo Vilniaus miesto teatro afišų kolekcija, atspindinti įvairų teatro repertuarą, to meto Vilniuje vykusį kultūrinį gyvenimą ir daugialypes tarpkultūrines sąsajas. Grafų Umiastovskių rūmuose (Trakų g. 2, Vilnius) surengta paroda „XIX a. Vilniaus miesto afišos  Vilniaus kultūrinio gyvenimo veidrodis". Vilniaus miesto istorinė tarpkultūrinė raida aptarta ir tarptautinėje konferencijoje „XIX a. Vilniaus miesto afišos: Vilniaus daugiakultūrinio gyvenimo aspektai", kurioje savo tyrinėjimus pristatė Lietuvos ir Lenkijos mokslininkai.
Teatro skyriaus fonduose saugoma įdomi bei spalvinga lėlių kolekcija iš įvairių Lietuvos lėlių teatrų. Pačios seniausios ir vertingiausios - Stasio Ušinsko marionetės. Tai pirmojo profesionalaus lietuvių lėlių spektaklio (A. Gustaičio „Silvestras Dūdelė", 1936 m.) bei pirmojo lietuvių lėlių filmo („Storulio sapnas", 1938 m.) lėlės. Gausios ir Kauno valstybinio lėlių teatro bei Vilniaus „Lėlės" teatro lėlių kolekcijos. Jų autoriai - žymūs menininkai Vitalijus Mazūras, Jūratė Račinskaitė, Rimas Driežis ir kt. Muziejaus saugyklose saugomos ir politinio „Šėpos" teatro lėlės, suvaidinusios savo pagrindinius vaidmenis per 1988-1992 metų įvykius. Be to, muziejuje galima išvysti Vegos Vaičiūnaitės aplinkos teatro „Miraklis", Klaipėdos universiteto lėlių teatro ,,Ku-kū" (vadovė Jūratė Januškevičiūtė) bei kitų teatrų lėlių.

2001 metais savo archyvą muziejui padovanojo teatrologas Vytautas Maknys. Tai vienas iš gausiausių ir informatyviausių muziejuje esančių asmeninių fondų. Dar 1928 metais pradėtą kaupti archyvą teatrologas pildė visą savo gyvenimą. Buvo surinkta dešimtys tūkstančių archyvinių vienetų apie teatrinę veiklą Lietuvoje nuo jėzuitų mokyklinio teatro įkūrimo XVI a. iki 2003 metų. V. Maknio archyve teatrinė veikla Lietuvoje pristatoma kaip kultūros reiškinys, glaudžiai susijęs su šalies ekonomine, politine bei kultūrine situacija. Todėl greta teatrologinių faktų, archyve surinkti duomenys plačiai atspindi įvairias šalies gyvenimo sritis: meną, kraštotyrą, kalbotyrą, politiką, ekonomiką ir kt. Be archyvo, V. Maknio fonduose yra ir biblioteka (per 5000 lituanistinės, teatrinės literatūros tomų, natų rinkinys) bei memorialiniai daiktai. Rinkinys įdomus ir brangus visiems, kas domisi Lietuvos krašto istorija.